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微生物检验员证怎么考农产品食品化验员培训报名-食品检测微生物样品前处理

微生物样品前处理是食品检测流程中不可或缺的重要环节，其工作量大、耗时较长，且处理结果直接影响后续检测的准确性。由于不同种类的样品因实验目的和样品性质的不同，实验室中的样品前处理方法也各具特色。

一、样品取样部位

（一）基本原则

在样品前处理的实际操作中，首先应遵循的基本原则是取样品的可食部分进行检验。例如，排骨样品应取其中的肉部分，花生或核桃等坚果类样品应取果仁部分。

（二）考虑消费者食用习惯

还需考虑消费者在食用这类食品时的常见习惯，判断这些习惯是否会导致非可食部分的微生物进入体内。例如，同属于坚果类样品，花生、核桃等需去壳取果仁部分检测，而瓜子一般带壳前处理。这是因为花生、核桃等通常用手剥开果壳食用，果壳上的微生物不太可能通过食用途径进入体内；而瓜子很多人直接放入嘴里磕开果壳食用，这种食用方式会增加微生物进入体内的可能性。

（三）考虑处理复杂程度和污染风险

此外，还需考虑前处理过程中的样品处理复杂程度和引入污染的风险程度。核桃和花生等样品较大，去壳过程简单便捷；而瓜子颗粒较小，去壳检测难度大，操作过程中也更容易造成样品污染。

二、样品取样量

（一）遵循采样方法

目前食品微生物样品的检验通常需要遵循二级采样法或三级采样法，每个检验项目一般需要25g或25mL的样品量。因此，在取样过程中应充分考虑取样量的问题，特别是对于含有非可食部分的样品，要确保用于检验的可食部分样品含量充足。

（二）计算样品数量

在实际工作中，如果某种产品的单个包装样品净含量少于25g，就需要计算好样品数量。例如，某种产品单个包装净含量为20g，不足25g，若该产品需要检测菌落总数且采用三级采样法（n=5），则需将两个独立包装的产品视作一份样品，共计采样10个单独包装，分作五份样品。若该产品还需同时检测菌落总数和沙门氏菌，则在此基础上应再加倍取样，每四个单独包装的产品视作一份样品。但需注意，同一批次的产品才能如此操作，否则无法根据标准要求对产品进行检验和报告。

（三）药典取样规定

药材取样也有严格规定，总包件数在100件以下的取样5件；100～1000件按5%取样；超过1000件的，超过部分按1%取样；不足5件的逐件取样；贵重药材不论包件多少均逐件取样。破碎或粉末状药材的取样量也有具体规定，如一般药材100～500g，粉末状药材25g，贵重药材5～10g，个大的药材根据实际情况抽取有代表性的供试品。

三、样品前处理操作

（一）无菌操作的重要性

无菌操作是微生物检验全流程都需要注意的重要事项，尤其是在样品的前处理阶段。由于样品通常保存在非无菌环境中，样品的外包装一般也不是无菌状态，打开样品包装的过程比较容易污染样品。

（二）包装消毒与工具灭菌

在打开包装前，使用75%的酒精对表面进行全面消毒是最常用的方法。同时，开包装用的工具（如剪碎或捣碎样品的剪刀、捣碎机以及取样用的镊子、取样勺等）均需要灭菌处理。

（三）具体无菌操作要求

1.     人员要求：接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽；进行接种食品样品时，需穿专用的工作服、帽及拖鞋，并放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。接种前应用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。

2.     器皿与培养基要求：接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

3.     无菌间要求：无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃并密封，设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗以备传递物品。无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯消毒，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯在距离1.0m处照射时间不少于30min。使用紫外灯时不得直接在紫外线下操作，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭以减少紫外线穿透的影响。处理和接种食品标本时进入无菌间操作不得随意出入，如需传递物品可通过小窗传递。若无菌间内安装空调，则应有过滤装置。

四、称量样品量

（一）标准要求与实际操作

打开样品包装后，需要称取（固体或半固体）或量取（液体）一定量的样品加入到稀释液或增菌培养基中。目前食品微生物学检验系列标准（GB4789系列）要求的样品量一般都是25g/mL。对于量取液体样品，由于使用移液管或移液器，可以较为准确地量取25mL；但对于固体和半固体样品，如何准确称取25g则是一个比较麻烦的问题。

（二）称量范围的建议

鉴于目前GB4789系列标准中要求的天平感量都是0.1g，并且标准中只给出了25g这一数值，而不是一个称量范围，实验室在操作中可参考以下建议：

1.     国内多数实验室操作：采用“四舍五入”的原则，即称取样品量为24.5g-25.4g，这也是很多专家推荐的操作方式。

2.     ISO标准要求：ISO 7218:2007中的5.3.1条款要求，除非另有说明，称量样品时最大允许误差应当低于1%。按照这个要求，称取样品的量应为24.75g-25.25g，但由于天平感量是0.1g，所以称取的样品量应为24.8-25.2g之间。

由于目前标准中没有准确要求，以上两个称量范围的要求都可以供实验室参考。因此，建议实验室制定自己的作业指导书，并在其中规定具体采用哪个称量范围。

五、样品稀释与混匀

（一）初级混悬液的制备

样品通过称取一定重量后或量取一定体积后，加入9倍重量或体积的特定稀释液，经过外力作用充分均质混匀后，得到悬浊液、溶液或者乳浊液，即初级混悬液（10-1）。有的初始混悬液中含有较大的样品颗粒时，应将其水平静置沉淀。

（二）次级十倍梯度稀释

取一特定体积的初级混悬液，加入9倍特定体积的稀释液充分混匀，这样就将初级混悬液进行了十倍稀释操作（10-2），然后依次再进行下去（10-3，10-4...10-n），得到一系列的稀释液，直至得到满足目标微生物培养要求的稀释液。这样的操作叫次级十倍梯度稀释，得到的一系列稀释液被统称为次级十倍梯度稀释液。初级混悬液的制备是为了让样品中的微生物尽可能均匀分布，然后在接下来的次级十倍梯度稀释液中，微生物的数量能按指数进行均匀规则的递减，这样通过培养之后，方便用于菌落计数操作。

（三）振荡混匀的要求

无论是初级样品混悬液还是次级十倍梯度稀释样品溶液，都应振荡均匀，保证其微生物在溶液中均匀分布之后再进行接下来的操作。振荡时应在涡旋混和器上进行，用右手拇指和中指夹紧试管，右手食指抵住试管帽，防止振动时试管帽飞出，三个手指用力将试管底部顶住涡旋混和器的橡胶振动头上。涡旋混和器运转时通常有两档，一个是振动头持续振动，一个是只有物品顶住振动头才会振动，通常选用后者。如果没有涡旋混和器，可以采用手心振动混匀的方法。

六、稀释液的选择与配制

（一）选择稀释液的原则

针对不同样品，应选择最适合的稀释液，这需要通过一系列的试验得到，所选择的稀释液应具有高的复苏率。例如，对于脂肪含量高的样品会加入乳化剂、表面活性剂；对于均质操作时容易起泡沫的样品会加入泡沫抑制剂、消泡剂等。对于高溶解度的干燥样品（如奶粉、婴儿食品）制成初级样品溶液时，水活度非常低，所以应选择蒸馏水作为稀释液。研究嗜盐菌（如食盐样品）应采用15%的无菌氯化钠溶液作为稀释液；嗜渗菌计数时，可以用20%的无菌蔗糖溶液作为稀释液，以保护菌体。

（二）配制稀释液的要求

1.     保证质量：配制稀释液的各种试剂或脱水成品培养基干粉一定要保证质量。

2.     使用合格蒸馏水：配制稀释液的水必须是合格的蒸馏水，水的各项指标（pH、水活度、电导率、电阻率、菌落总数）必须符合培养基配制用水的要求。

3.     充分溶解：稀释液各组分必须充分溶解形成均一溶液，无沉淀。

4.     pH要求：稀释液配好之后，pH要满足目标微生物的存活要求，特别是稀释液经高压灭菌之后的pH，pH误差的正常范围应在±0.2（25℃时）。可以在稀释液中加入磷酸盐缓冲液来稳定pH的变化。

微生物样品前处理是食品检测中的关键环节，其处理结果直接影响后续检测的准确性。实验室工作人员应严格遵循取样、无菌操作、称量、稀释与混匀、稀释液选择与配制等方面的规范要求，确保样品前处理工作的科学性和结果的可靠性。