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考证季｜无菌微生物检验员&食品化妆品化验员培训报名-培养基琼脂厚度对凝胶强度的影响

在微生物检测、菌种培养、药品无菌检查与食品卫生检验等工作中，固体培养基是不可或缺的基础耗材。琼脂作为形成固体基质的核心成分，其凝胶强度决定了培养基的物理稳定性。通过调整凝胶强度的来服务试验要求是最直接的方法，而在琼脂浓度、灭菌条件、冷却制度等关键参数固定时，培养基在平皿中的凝胶厚度是决定凝胶强度测定值是否真实、稳定、可重复的关键变量。

本文将以实际试验数据为基础，系统介绍不同厚度对凝胶强度的影响规律，确定凝胶强度测试的最优厚度区间。

实验原理

1琼脂凝胶形成与强度测试原理

琼脂是从石花菜等红藻类植物中提取的天然多糖类物质，主要由中性琼脂糖和酸性琼脂胶组成，其中琼脂糖是形成凝胶的核心组分。琼脂悬浮液在高温下可形成均匀溶液，冷却过程中，琼脂糖分子通过氢键相互作用形成双螺旋结构，进而交织成网状结构，将分散的水分包裹其中，最终形成具有一定强度和弹性的凝胶体系。

凝胶强度是衡量琼脂品质的核心指标，指凝胶抵抗外力破坏的能力，其大小与琼脂分子形成的结构致密程度密切相关。在琼脂浓度、加热时间、冷却条件等其他因素固定的前提下，改变琼脂凝胶的厚度，会影响凝胶内部分子的交联密度和受力传递效率：厚度过小时，分子交联形成的结构相对薄弱，受力时易发生断裂；厚度增加时，分子交联点增多，结构更致密，受力传递更均匀，凝胶强度可能随之变化，但当厚度达到一定阈值后，分子交联达到饱和，凝胶强度可能趋于稳定。

2影响凝胶强度的因素

（1）底部效应

底部效应指凝胶样品太薄时，探头在下压过程中，未等凝胶内部发生标准破裂，应力波就已经穿透凝胶层触及到了坚硬的容器底部（玻璃或塑料平皿），导致测得的数值实际上是容器底部的反作用力，而非凝胶自身的强度。表现为数据曲线出现斜率陡增或陡降。因凝胶内部未发生破裂，测得压力值为底部反作用力，导致测得数据偏大；或因探头下压过程中，凝胶内部发生破裂过早，压力值剧烈变化，导致测得数据偏小

（2）边缘效应

边缘效应指探头下压点过于靠近容器侧壁时，凝胶的受力变形受到了刚性侧壁的约束。凝胶无法向四周自由扩张破裂，导致测得的强度值异常偏高。表现为数据重复性差，变异系数较大。

厚度对凝胶强度的影响研究试验

1试验材料

1.培养基：HB0177胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）

2.器皿：9 cm无菌空平皿

3.仪器：HBS-NJ01凝胶强度测定仪

2培养基制备

精确称量培养基干粉，配制试验平行3组，进行121℃15 min灭菌。灭菌完成后，水浴冷却至50℃，按梯度体积（10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40 mL）倾入9 cm无菌空平皿。水平静置冷却2 h，确保凝胶充分定型且无冷凝水干扰。

3平皿厚度与凝胶强度测量

测试点位于平皿几何中心，避开边缘与气泡；使用游标卡尺进行测量，记录每个样品的中心厚度；使用HBS-NJ01凝胶强度测定仪测量中心位置的凝胶强度，计算各组平行的平均值，绘制厚度强度曲线。

表1 培养基不同容量与体积时的凝胶强度测定值

图2 厚度与凝胶强度的关系曲线图

4试验结论

1.低厚度区间受底部效应显著：1.84 mm（10 mL）时凝胶强度明显偏低，平行数据波动大，符合底部效应特征，测得值不能真实反映凝胶本征强度。

 2.厚度约2.3 mm~3.6 mm时，14 mL~26 mL区间强度较高且相对稳定：凝胶强度整体维持在较高水平，无明显底部或边缘干扰，数据重复性较好。

 3.厚度约3.6 mm~5.2 mm时，26 mL~34 mL区间，随厚度增加，对比平均值曲线的差异波动变大，且凝胶强度整体下降。最终随厚度增加超过5.3 mm后，凝胶强度向略小的某个数值无限接近。

 4.从数值来看，9 cm平皿分装厚度约2.3 mm~5.2 mm（体积约14 mL~34 mL）可在避免底部效应的同时获得稳定、较高的凝胶强度测定值。

 5.从实际应用角度进行综合考虑，厚度低于2.7 mm（对应体积小于18 mL）时，凝胶层较薄，刚性不足，微生物划线过程中极易被接种环划破，导致培养基破损、影响试验顺利开展；而厚度超过4.0 mm（对应体积大于28 mL）时，凝胶强度与平均值曲线的波动开始变大，且消耗更多培养基原料，造成培养基浪费；凝胶厚度在2.7 mm~4.0 mm时最为合适，此区间对应培养基体积约18 mL~28 mL，凝胶强度稳定。