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霉菌和酵母菌计数检验方法-化妆品安全技术规范(2022年版)

1.范围

  本规范规定了化妆品中霉菌和酵母菌数的检验方法。

  本规范适用于化妆品中霉菌和酵母菌数的测定。

2.定义

  2.1 霉菌和酵母菌数测定Molds and yeasts count

  化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后，1g (1mL)检样中形成的霉菌和酵母菌总数，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。

  本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

3.仪器和设备

  3.1 恒温培养箱:28℃±2℃。

  3.2 振荡器。

  3.3 三角瓶:250mL。

  3.4 试管:18mm×150mm。

  3.5 灭菌平皿:直径90mm。

  3.6 灭菌刻度吸管:10mL、1mL。

  3.7 量筒:200mL。

  3.8 酒精灯。

  3.9 高压灭菌器。

  3.10 恒温水浴箱。

4培养基和试剂

  4.1 生理盐水

  见总则中3.1。

  4.2 虎红（孟加拉红）培养基

  制法:将上述各成分(除虎红外)加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液。分装后，121℃高压灭菌20min，另用少量乙醇溶解氯霉素，溶解过滤后加入培养基中，若无氯霉素，使用时每1000mL加链霉素30mg。

5操作步骤

  5.1 样品稀释

  见菌落总数测定中5.1。

  5.2 取1:10、1:100、1:1000的检液各2mL，分别注入2个灭菌平皿内，每皿1mL，注入融化并冷却至45℃±1℃左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28℃±2℃培养5d，观察并记录。另取一个不加检液的灭菌空平皿，加入约15mL虎红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置28℃±2℃培养箱内培养5d，为空白对照。

  5.3 计算方法:先点计每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时,应选取菌落数在5CFU~50CFU范围之内的平皿计数,乘以稀释倍数后，即为每g(或每mL)检样中所含的霉菌和酵母菌数。其他范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。

  5.4 每g(或每mL)化妆品含霉菌和酵母菌数以CFU/g (mL)表示。