1）细菌的种类与数量：不同细菌的不同发育阶段对热的抵抗力有所不同。细菌数越少，灭菌时间越短。

2）蒸汽的性质：蒸汽有饱和蒸汽，湿饱和蒸汽和过热蒸汽。饱和蒸汽热含量较高，热穿透力较大，因此灭菌效力高。湿饱和蒸汽带有水分，热含量较低，穿透力差，灭菌效力较低。过热蒸汽温度高于饱和蒸汽，但穿透力差，灭菌效率低。

3）介质的性质：制剂中含有营养物质，如糖类、蛋白质等，增强细菌的抗热性。细菌的生存能力也受介质PH值的影响。一般中性环境耐热性最大，碱性次之，酸性不利于细菌发育。

4）物品的性质与灭菌时间：一般来说，灭菌温度越高灭菌时间越短。湿热灭菌法一般采用121℃，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。但考虑到被灭菌物的稳定性，应在达到有效灭菌的前题下可适当降低灭菌温度或缩短灭菌时间。

湿热灭菌法可分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法

（1）煮沸消毒法：即利用煮沸100℃经5min可杀死一切细菌的繁殖体。一般消毒以煮沸10min为宜。

多用于餐具和婴幼儿奶具的消毒，有时亦用于对某些耐热、耐湿医疗器材的消毒或灭菌。煮沸可使刀刃等的锋利性受损，使用时应注意。因处理后易再污染，一般多只用于消毒，不用于灭菌处理。必需用于灭菌时应延长煮沸时间。

（2）巴氏消毒法：利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。

巴氏灭菌法主要为牛奶的一种灭菌法，既可杀死对健康有害的病原菌又可使乳质尽量少发生变化。巴氏杀菌不可能杀死所有细菌，它只能将致病菌的数量降低到对消费者不会造成危害的水平。巴氏灭菌法除牛奶之外，也可应用于发酵产品

（3）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。

湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，因为：①湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；②水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能；③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。

湿热灭菌法一般采用121℃，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。

（4）流通蒸气灭菌法：指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。

该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。

（5）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。