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粪肠球菌的检验方法-环境监测员资格证化验员培训
来源:广州圣问技术服务有限公司 | 作者:stspx134 | 发布时间: 2020-05-08 | 134 次浏览 | 分享到:
根据最新分类原则,粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原,根据兰氏(Lancefield)血清学分类,可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌(S.faecalis)、屎链球菌(S.faecium)和坚忍链球菌(S.durans),后者有牛链球菌(S.bovis)和马肠链球菌(S.equinus)

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粪肠球菌的检验方法-环境监测员资格证化验员培训

一、生物学性状

根据最新分类原则,粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原,根据兰氏(Lancefield)血清学分类,可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌(S.faecalis)、屎链球菌(S.faecium)和坚忍链球菌(S.durans),后者有牛链球菌(S.bovis)和马肠链球菌(S.equinus)。

粪链球菌菌形圆或椭圆,可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑,直径1-2mm,全缘,罕见色素。其营养要求低,在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃  pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长,并能耐65℃  30分钟。它可利用精氨酸为能源,发酵山梨醇,不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。

近年来,DNA-DNA杂交结果显示,肠球菌与链球菌属同源程度低,故有学者建议另立肠球菌属,与人类有关者为粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(E.faecium)。

二、致病性

粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染,皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从天然乳清培养物中分离的菌株,能产生一种细菌素,叫肠球菌素(Enterocin),对单增李斯特氏菌有杀灭作用。

三、流行病学

粪链球菌为条件致病菌,它来源于人和温血动物的粪便,偶尔出现于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染,因而常见于许多食品,如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等,粪链球菌进入食物链的主要原因是不卫生的加工条件所致的,一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成,感染剂量较高,一般大于107个细菌。人、禽感染率最高,亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。

四、检验与控制

1、检验

样品制备 取25g或25mL样品,放入225mL灭菌生理盐水中,充分混匀,制成1:10样品稀释液。根据样品的污染程度,制成适当的10倍递增稀释液。

a.多管法

用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的,使用10mL单料管;接种量为10mL,使用10mL双料管。35℃培养24-48h,并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上,倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落,确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数,查MPN表,报告每克样品中的粪链球菌MPN值。

b.滤膜法

倾注融化的4-5mL的KF琼脂于平板上,若平板表面有气泡,可用火焰灼除。根据样品的污染程度,使用样液的量为100,10,1.0,0.1或0.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液,以能在滤膜上生长出20-100个菌落为宜。将滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培养基表面上,避免出现气泡。倒置平板于36℃培养48h。粪链球菌在KF平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。将典型菌落接种于脑心浸液斜面上,36℃培养48h。用其培养物做过氧化氢试验,过氧化氢浓度为3%,阳性反应者为非粪链球菌群细菌。将阴性反应者接种于脑心浸液肉汤,置45.5℃培养48h;同样方式接种一管胆盐肉汤,置36℃培养3天。在上述两种情况下生长者为粪链球菌。选择生长20-100个菌落的滤膜,根据所使用的样品量,计算出样品每克(毫升)中的粪链球菌数。

c.平板计数法

取1mL适当稀释液加入培养皿内,倾入12-15mL的KF或PSE培养基,转动平板充分混合。凝固后置36℃培养,KF平板培养48h,PSE平板培养24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落,边缘整齐,琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状;在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。

2、控制

由于粪链球菌可通过食物对人类造成感染,所以应从以下几个方面加以控制:

加强生产区域的卫生管理,由于粪链球菌主要来源于人畜粪便,所以厕所要合理布局,避免粪便直接污染;生产人员要严格执行个人卫生制度。

在加工过程中,严格注意每个关键点的控制,掌握好诸如温度、水源卫生等要素。

对摆放时间过长的食物,如熟食制品、牛奶或奶制品等,要彻底加热再食用,春夏季尤其要注意。

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