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水体中大肠菌群的检测-水质检验员资格证化验员培训
来源:圣问技术职业技能培训中心 | 作者:stspx134 | 发布时间: 2021-04-09 | 139 次浏览 | 分享到:
所谓大肠菌群,是指在37℃培养24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成,即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属

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水体中大肠菌群的检测-水质检验员资格证化验员培训

一、实验原理

所谓大肠菌群,是指在37℃培养24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成,即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值,以大肠菌群最近似数(MPN)表示。在正常情况下,肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源,由于大肠菌群在肠道内数量多,所以,水源中大肠菌群的数量,是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前,国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检测方法,常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可适用于各种水样的检验,但操作繁琐,需要的时间较长。滤膜法仅适用于自来水和深井水,操作简单、快速,但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

二、材料与器皿


(—)培养基

1、普通乳糖蛋白胨培养液

蛋白胨 10g,牛肉膏 3g,乳糖5g,氯化钠 5g,1.6%溴甲酚紫乙醇液 1.0mL,蒸馏水 1000mL,pH 7.2~7.4。

将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中,调节pH为7.2~7.4,再加入1.6%溴甲酚紫乙醇液1.0mL,充分混匀,分装于有杜汉氏小管的试管中,每管10mL,115℃灭菌20min。

2、三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液

按上述普通乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制,分装于有杜汉氏小管的试管中,每管5mL。

3、 品红亚硫酸钠培养基(供平板分离用)

蛋白胨 10g, 乳糖 10g,K2HPO4 3.5g,琼脂 15~20g,蒸馏水1000mL,无水亚硫酸钠5g,5%的碱性品红乙醇溶液 20mL,pH 7.2~7.4。

4、伊红美蓝培养基(EMB培养基)(供发酵法平板分离用,3和4可任选一种)

蛋白胨10g,乳糖10g,K2HPO4 2.0g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,2%伊红(曙红)水溶液 20mL,5%美蓝(亚甲蓝)水溶液13mL,pH 7.2~7.4。

 

(二)器皿

灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染色液、灭菌培养皿。

三、实验过程

 

(一)水样的采集

供细菌学检验的水样,必须按一般无菌操作的基本要求采集,并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h ,在0~4℃下保存不应超过24h ,如不能在4h 内分析,应在检验报告上注明保存时间和条件。

1、自来水取样:应在水龙头打开放水5min ,再用无菌容器接取水样,待分析。如水样内含有余氯,则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。

2、江、河、湖、池自然水体取样:可用采样器,采样瓶应先灭菌。采样后,瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样,细菌学分析水样应采在其他样品之前。

 

(二)初发酵试验

1、水样稀释:制备水样10-1、10-2的稀释液,方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中,充分振荡使混合均匀,并使其中的细菌尽量呈单个存在,即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。以此类推,稀释到所需倍数。

2、接种和培养:以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL,5支普通培养基试管中加入水样1mL,5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL, 小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。此即5管法。

3、结果观察:37℃中培养24h后取出观察,观察有无气体(杜汉氏小管内有无气体)和酸产生(培养基有无变色)。在48h之间,培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累,或培养基颜色从紫色变为黄色,便可初步断定为阳性反应。

若实验所测定的15支管中均为阳性反应,说明浓水样污染严重,可将样品进一步稀释后,再按上述方法接种、培养和观察。


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