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无菌化验员培训微生物检验员资格证,一站式报名学习考证-培养基保存期的规定与比较：基于2025版中国药典的解析

引言

2025版中国药典明确规定："制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2-25℃环境下保存，并在经验证的效期内使用。"这一修订与旧版药典允许保存一年的规定形成显著差异，凸显了培养基保存效期确认的必要性。不同类型培养基因成分差异、灭菌工艺及保存条件的不同，其保存期限存在显著差异。本文结合药典要求与实验数据，系统梳理无菌检查法及微生物限度检查用培养基的保存特性，为实验室规范操作提供参考。

一、无菌检查法用培养基的保存特性

1. 胰酪大豆胨液体培养基（TSB）

TSB的稳定性受灭菌工艺与保存条件双重影响：

• 灭菌工艺选择：高压蒸汽灭菌易导致糖类焦化与维生素分解，而过滤除菌工艺可显著延长保存期。实验表明，过滤除菌的TSB在25-30℃下长期储存时，颜色加深与pH下降幅度均低于高压灭菌样品。

• 保存条件优化：冷冻保存虽不导致质量失效，但可能引发颜色不均，需摇匀后通过微生物灵敏度测试。减少容器内空气含量或充氮保护可进一步延长保存期，同时需避免光照以防止维生素类成分分解。

2. 硫乙醇酸盐流体培养基

该培养基因含少量琼脂与高浓度葡萄糖，保存条件更为苛刻：

• 灭菌方式限制：仅能采用高压蒸汽灭菌，导致保存过程中pH下降更显著。

• 容器选择与氧化控制：需使用玻璃输液瓶与胶塞密封，减少空气含量或充氮保护以防止氧化层形成。冷冻保存会破坏琼脂结构，导致黏度下降与氧气渗入加速。

3. 胰酪大豆胨琼脂培养基

其保存核心矛盾在于失水与温差控制：

• 密封与温度平衡：制备好的平皿需密封保存，15-25℃为最佳保存温度。若采用密闭容器（如玻璃输液瓶），保存期可延长至3个月以上。

• 冷冻禁忌：含琼脂培养基冷冻后结构破坏，超过25℃保存虽不影响质量，但会加速失水。

4. 沙氏葡萄糖琼脂（SDA）等高糖培养基

SDA、沙氏葡萄糖液体（SDB）与马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）因高葡萄糖含量，保存过程中pH易下降：

• 灭菌工艺影响：SDB可采用过滤除菌延长保存期，而SDA与PDA仅能高压灭菌。

• 推荐保存期：实验室建议1个月内使用，或通过验证延长储存时间。

5. 简单成分培养基

0.1%无菌蛋白胨水与pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液因不含糖且成分简单，稳定性优异：

• 灭菌工艺兼容性：高压蒸汽灭菌或过滤除菌均可，密闭环境中可保存数年。

• 超温耐受性：超温保存对质量影响较小。

二、微生物限度检查用培养基的保存特性

1. 含指示剂液体培养基

肠道菌增菌液体培养基、麦康凯液体培养基与RV沙门菌增菌液体培养基均含颜色指示剂，对光照敏感：

• 避光与低温保存：2-8℃下可保存半年以上，冷冻无显著不良影响。

2. 含指示剂琼脂培养基

麦康凯琼脂、甘露醇氯化钠琼脂与三糖铁琼脂的指示剂稳定性与水分控制是关键：

• 半成品保存：密闭容器中2-8℃避光保存3-6个月。

• 平板保存：未密封平板易失水变干，密闭条件下2-25℃保存建议3个月内使用，且不可冷冻。

3. 加热灭菌型显色培养基

紫红胆盐葡萄糖琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂与念珠菌显色琼脂因加热煮沸灭菌工艺，成分相对不稳定：

• 推荐使用方式：建议现配现用或次日使用，2-8℃避光密封冷藏可提升稳定性。

4. 特殊成分培养基

• 溴化十六烷基三甲铵琼脂：2-25℃密封保存，需控制温差以减少水汽。

• 梭菌增菌培养基：覆盖液体石蜡隔绝空气，2-25℃密封保存即可。

• 哥伦比亚琼脂培养基：需加入除氧剂无氧保存，含庆大霉素时需2-8℃避光冷藏。

三、保存期验证的核心方法

实验室需通过系统实验确定培养基保存期，典型案例如下：

• 验证对象：营养琼脂、麦康凯琼脂、沙氏葡萄糖琼脂。

• 贮存条件：4℃冷藏避光。

• 检测指标：

1.     pH值：营养琼脂初始pH7.2，28天后未变化，但菌落数下降30%。

2.     微生物生长支持能力：以标准菌株接种，菌落数下降超20%需警惕。

3.     无菌检查：麦康凯琼脂35天出现杂菌，无菌性不达标。

• 结论：营养琼脂与麦康凯琼脂保存期28天，沙氏葡萄糖琼脂35天。

四、规范保存的实践建议

1. 标签管理：标注配制日期、有效期及保存条件。

2. 环境控制：保持干燥、避光、低温，减少温差波动。

3. 定期验证：当贮存条件或配方调整时，需重新验证保存期。

4. 风险规避：过期或异常培养基（如浑浊、沉淀、变色）需立即销毁。

结论

培养基保存期的科学管理是实验结果可靠性的基础。2025版药典通过强调"经验证的效期"，推动实验室从经验判断转向数据驱动。结合灭菌工艺、成分特性与保存条件，分类制定保存策略，可最大限度维持培养基活性，为微生物检测与细胞培养提供坚实保障。