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制作菌悬液稀释方法-分析检测检验化验员培训
在进行低浓度定量菌株菌悬液制作时，通常使用十倍或百倍稀释法进行制作。
十倍稀释法的具体操作步骤：
1、将生理盐水（或磷酸盐缓冲液等）分装至试管中，每支装量为9mL（百倍稀释可用10mL，特殊情况也可使用9mL做近似百倍稀释），进行灭菌处理（121℃灭菌15-30min即可）；
注：在进行厌氧菌（如生孢梭菌，产气荚膜梭菌）稀释时，选用0.1%蛋白胨水或pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液做为稀释剂效果更佳；若不在厌氧环境中操作，从开始稀释至使用菌悬液结束要控制在15min以内，时间过长会导致菌体死亡。
2、将灭菌后装有9mL生理盐水的试管编号1，2，3，4，5，6，7，8。
3、将一定量的菌加入至编号1的试管中制成第一稀释梯度菌悬液（通常称为10-1梯度），使用旋涡振荡器混匀。
4、吸取1mL10-1梯度菌悬液至编号2的试管中，混合均匀，就得到了第二稀释度的菌悬液（通常称为10-2梯度，若吸取10-1梯度菌悬液100μL至10mL生理盐水管中，即为百倍稀释，可以直接得到10-3梯度菌悬液）。
5、以此类推，可以得到10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8梯度菌悬液，每一支管的含菌量都是前一直管的1/10，第8支管的菌液浓度就是第1支管的千万分之一了，如果第一支试管含菌量是109CFU/mL，第8支管就可以得到100CFU/mL左右浓度的菌悬液了。
制备第一支试管的菌悬液及确定第一支试管中菌液的浓度，一般采用以下四种方法：
麦氏比浊法：
将一定量培养好的细菌转移到第一支试管中(可以用菌液，可以挑取菌落），制备成约5麦氏浊度的均一浑浊菌悬液（约109CFU/mL）。
优点：新手可直接上手操作。
缺点：不同细菌体积大小有差别，有些芽孢菌容易聚成团块不易制得均一悬液；不适用于真菌孢子悬液制备。
注意事项：不同细菌的麦氏浊度与浓度之间存在差异，第一次试验之前最好先进行验证；麦氏浊度无法区分细菌死活，因此最好使用新活化的菌制备；真菌（酵母菌）体积较大，同等浊度下浓度约为细菌的1/20。
吸光度法：
细菌在600nm波长处具有最大吸光度，在一定浓度下，细菌的浓度与OD600nm呈正比关系，因此可以通过测量OD600nm值来确定菌悬液浓度。此方法更常用于测定菌液浓度（观察细菌生长曲线），也可在制备105-107CFU/mL的菌悬液时使用，不适用于低浓度菌悬液制备。
菌液稀释法：
将菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养，吸取1mL培养物至9mL生理盐水中制成10-1梯度菌悬液（约108CFU/mL），稀释至10-6或10-7即可得到10-100CFU/mL菌悬液。
优点：操作简单
缺点：菌数不稳定，受细菌种类、培养基影响较大；仅适合均匀浑浊生长的细菌或真菌；若培养过程发生污染，不易察觉。
注意事项：不同菌株生长时间不同，在不同培养基中生长浊度也不同，如大肠埃希氏菌、金黄色葡萄菌、沙门氏菌等在TSB中过夜培养即可，乳酸菌通常需在MRS肉汤中培养48-72h，酵母菌、白色念珠菌需在SDB培养基中培养3-5天。酵母菌、芽孢菌通常在10-5稀释度左右，就可以得到10-100CFU/mL的菌悬液。
菌苔稀释法：
从平板或斜面上挑取一定量的菌苔（2-3mm单个菌落，菌落偏小可多挑几个菌落）至9mL生理盐水中振荡均匀，制成10-1梯度菌悬液（约108CFU/mL），稀释至10-7或10-8即可得到10-100CFU/mL菌悬液。
优点：操作简单，相比较于其他稀释方法，最大优势就是更容易准确控制菌数浓度；适用范围广，细菌、真菌均可采用此方法制备菌悬液。
缺点：需要尝试和经验
注意事项：不同菌株制成的菌悬液浓度同样存在差异，初次进行特定菌株稀释时需要做验证；一般非芽孢细菌制成的10-1梯度菌悬液约为108-109CFU/mL，而芽孢菌和酵母菌制成的10-1梯度菌悬液约为106-107CFU/mL。初次进行菌液制备时，可以选用方法1和方法4，多做几个稀释度测试，熟练有经验后使用方法4进行菌液制备，可轻松准确制得10-100CFU/mL或20-200CFU/mL浓度菌悬液。
